發(fā)布時(shí)間： 2021-04-16 點(diǎn)擊次數(shù)： 745次
人Ⅳ型膠原ELISA檢測(cè)試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的人Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。
本試劑盒組成如下：
實(shí)驗(yàn)前，要先進(jìn)行洗滌，本試劑盒洗滌方法如下：
1.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒。洗板5次。
2.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。
人Ⅳ型膠原ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，并盡量避免起泡。
1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體，甩干，每個(gè)孔中加入工作液100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制)，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育1小時(shí)。
3.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl/每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
4.每孔加工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時(shí)。
5.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。
6.每孔加底物溶液100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯色的情況酌情縮短或延長(zhǎng)，但不可超過(guò)30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí)，即可終止)。
7.每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開(kāi)酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測(cè)程序。
9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。
當(dāng)然，要想實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加可靠，這些事項(xiàng)也是要引起注意的：
1、濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
2、如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔一孔的OD值），請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其正確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)目多，推薦使用排槍加樣。
4、嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操縱進(jìn)行，人Ⅳ型膠原ELISA檢測(cè)試劑盒試驗(yàn)結(jié)果判定須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
您的位置：網(wǎng)站首頁(yè) > 新聞資訊 > 人Ⅳ型膠原ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)不容易，其中還有這么多學(xué)問(wèn)！ 
地址：上海市奉賢區(qū)南橋鎮(zhèn)寧福路288號(hào)1幢6層
郵箱：brispring@163
在線(xiàn)交流