生長因子elisa試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被人血小板衍生生長因子（PDGF）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人血小板衍生生長因子（PDGF）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

　　生長因子elisa試劑盒操作流程如下：

　?。?）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。

　?。?）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。

　?。?）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

　?。?）陰性對照孔每孔加入pbs50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。

　?。?）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

　　（6）洗板，同（4）。

　　（7）每孔加1:5000稀釋的hrp-標(biāo)記的抗兔抗體工作液100μl。

　　（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

　?。?）洗板，同（4）。

　?。?0）每孔加tmb顯色液100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

　?。?1）每孔加100μl2mol/lh2so4終止反應(yīng)。

　　（12）分別測450nm吸光值w1和630nm吸光值w2，終測得的od值為兩者之差（w1-w2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

　　（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（s）和陰性對照（n）的od值后，計算s/n值。s/n***2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。

　　結(jié)果判斷：

　　繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

　　生長因子elisa試劑盒實驗說明：

　　1、試劑盒保存：-20（較長時間不用時）；2-8（頻繁使用時）。

　　2、濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

　　3、中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準(zhǔn)。

　　4、剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。